反相色譜系統(tǒng)使用非極性填充劑，常用的高效液相色譜柱填充劑為化學鍵合硅膠，以十八烷基硅烷鍵合硅膠最為常用，辛基硅烷鍵合硅膠和其他類型的硅烷鍵合硅膠（如氰基鍵合硅烷和氨基鍵合硅烷等）也有使用。正相色譜系統(tǒng)使用極性填充劑，常用的填充劑有硅膠等。離子交換色譜系統(tǒng)使用離子交換填充劑；分子排阻色譜系統(tǒng)使用凝膠或高分子多孔微球等填充劑；對映異構(gòu)體的分離通常使用手性填充劑。填充劑的性能（如載體的形狀、粒徑、孔徑、表面積、鍵合基團的表面覆蓋度、含碳量和鍵合類型等）以及高效液相色譜柱的填充，直接影響供試品的保留行為和分離效果。分析分子量小于2000的化合物應選擇孔徑在15nm（1nm=10A）以下的填料，分析分子量大于2000的化合物則應選擇孔徑在30nm以上的填料。除另有規(guī)定外，普通分析柱的填充劑粒徑一般在3～10μm之間，粒徑更小（約2μm）的填充劑常用于填裝微徑柱（內(nèi)徑約2mm）。
  使用微徑柱時，輸液泵的性能、進樣體積、檢測池體積和系統(tǒng)的死體積等必須與之匹配；如有必要，色譜條件也需作適當?shù)恼{(diào)整。當對其測定結(jié)果產(chǎn)生爭議時，應以品種項下規(guī)定的色譜條件的測定結(jié)果為準。
  以硅膠為載體的鍵合固定相的使用溫度通常不超過40℃，為改善分離效果可適當提高高效液相色譜柱的使用溫度，但不宜超過60℃。

本文關鍵詞：高效液相色譜柱 高效液相色譜柱要求